Se conoce que 25-hidroxicolesterol, un derivado de la oxidación de colesterol, induce apoptosis en las células linfoblásticas CEMC7. El mecanismo responsable de este proceso no se conoce, pero se ha sugerido que la producción de radicales libres de oxígeno puede jugar un papel importante. Se ha demostrado previamente en el laboratorio en el cual trabajo que la apoptosis inducida por 25OHC induce daño al DNA mitocondrial. Nuestra hipótesis es que este daño envuelve la regulación de las expresión de dos enzimas localizadas en la mitocondria. Éstas son: MnSOD, la cual tiene propiedades antioxidantes, y APE1, la cual actúa como una proteína de reparación en mtDNA. Para probar esta hipótesis, lo que hicimos fue exponer al clono sensitivo CEMC7 y al clono de células M10R5,que es resistente a apoptosis, a 25OHC. Luego hicimos un análisis de Western blot.
Como había mencionado anteriormente, este semestre me dediqué a analizar estadísticamente los datos de cuatro experimentos que se habían trabajado el semestre pasado. Esta vez se incluyeron membranas nuevas que ofrecían una mejor señal de las proteínas de interés, esto gracias a al desarrollo de un mejor manejo de la técnica de Western blot y de la aplicación de varias formas de “troubleshooting” que se consiguieron mediante un proceso de “trial and error.”
Los resultados para este semestre, en los cuales se observa una disminución en la expresión de MnSOD y APE luego del tratamiento con el agente apoptótico 25OHC en las células CEMC7, sugiere que la disminución de ambas proteínas podría jugar un papel importante en la sensitividad de este clono a 25OHC.
Hasta el momento, las metas para el próximo semestre incluyen la incorporación y análisis de datos de nuevos experimentos con MnSOD y APE1, así como experimentos en los cuales midamos la generación de radicales libres de oxígeno en ambos clonos de células, CEMC7 y M10R5.
