Este semestre tengo como objetivo el medir especies reactivas (RS) en las células linfoides humanas CEM tratadas con el agente apoptótico 25-hidroxicolesterol. Esto se debe a que nuestra hipótesis establece que 25OHC induce apoptosis por medio de la formación de radicales libres. La nueva metodología a utilizarse implica el uso del compuesto 2,7-dichlorofluorescein diacetate (DCFDA) el cual, al ser añadido a las células, es hidrolizado por esterasas celulares y luego es oxidado en presecia de RS, resultando en un compuesto fluorescente. La fluorescencia es entonces cuantificada para determinar la presencia de RS en la muestra.
Este trabajo se relaciona con el del semestre anterior, ya que intentamos medir directamente la producción de RS, mientras que en el pasado, medimos indirectamente mediante un enfoque en la expresión de dos proteínas, MnSOD y APE1, con propiedades antioxidantes y con funciones de reparación de mtDNA, respectivemente.
Las metas para este semestre constituyen llevar a cabo experimentos de dosis-repuesta para determinar la concentración óptima de DCFDA que no sea tóxica para nuestras células, así como experimentos de transcurso de tiempo luego que la concentración óptima sea determinada, todo esto sin tratar las células con 25OHC. Luego luego de tener una concentración y tiempo óptimo establecido, se pasará al diseño del experimento donde las células sean tratadas con 25OHC.
Mucho exito en lograr las metas que se han programado para el semestre!